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细胞培养步骤及注意事项

发布日期: 2020-02-10
浏览人气: 86
细胞培养步骤:

1.培养基及培养冻存条件准备:

准备F-12K培养基(F-12K : GIBCO,货号:21127-022);北美胎牛血清,10%; PS 1%。

培养条件:气相:空气,95%;二氧化碳,5%。温度:37摄氏度,培养箱 湿度为70%-80%。

冻存液:90%血清,10%DMSO,现用现配,液氮储存。

2.细胞处理:

复苏细胞:将含有lmL细胞悬液的冻存管在37°C水浴中迅速摇晃解冻,加 入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补 加l-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜(或将 细胞悬液加入l〇cm皿中,加入约8ml培养基,培养过夜)。第二天换液并检 查细胞密度。

细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。

注意事项:

收到细胞后,若发现干冰己挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染, 请立即与我们联系。

所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性,必须在二级生物安全台内操作, 并请注意防护,所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。
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